摘要：
   培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型，對營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同，加之實(shí)驗(yàn)和研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養(yǎng)角度分析，培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長素以及水分等。另外，培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。滅菌常用的方法有化學(xué)試劑滅菌、射線滅菌、干熱滅菌、濕熱滅菌和過濾除菌等。可根據(jù)不同的需求，采用不同的方法，如培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌，空氣則采用過濾除菌。
關(guān)鍵詞：滅菌  方法  技術(shù)
   在醫(yī)學(xué)中微生物的殺滅叫滅菌；滅菌的結(jié)果是無菌，也就是說指定樣品經(jīng)過一系列處理后不含任何微生物。例如手術(shù)器械的消毒過程等。微生物的滅菌如果用加熱方法與溫度有關(guān)外還和作用時(shí)間有關(guān)。100度溫度下加熱30分左右時(shí)候基本上大部分微生物會被殺滅，但是細(xì)菌的芽孢卻例外，能耐高溫。
   在醫(yī)學(xué)實(shí)踐中，常采用物理、化學(xué)及生物的方法，清除環(huán)境中的微生物，以切斷傳播途徑，保護(hù)易感人群，從而控制或消滅傳染病。現(xiàn)將有關(guān)術(shù)語介紹如下：
   消毒 (disinfection) 殺滅物體上病原微生物的方法，稱為消毒。用于消毒的化學(xué)藥品稱消毒劑。常用濃度下的消毒劑，只對細(xì)菌繁殖體有效，對其芽胞則需提高消毒劑濃度和延長作用時(shí)間才能殺滅。
   滅菌 (sterilization) 殺滅物體上所有微生物，包括細(xì)菌芽胞的方法，稱滅菌。
   無菌 (asepsis) 物體中無活的微生物存在，稱為無菌。防止微生物進(jìn)入機(jī)體或物體的方法，稱為無菌操作或無菌技術(shù)。進(jìn)行微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、外科手術(shù)、換藥、注射時(shí)，均需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)定。
   防腐 (antisepsis) 防止或抑制微生物在物體中生長繁殖的方法，稱防腐。用于防腐的化學(xué)藥品稱防腐劑。使用同一種化學(xué)藥品低濃度時(shí)為防腐劑，高濃度則為消毒劑。
衛(wèi)生清理 (sanitation) 將微生物污染了的無生命物體表面還原為安全水平的處理過程。例如醫(yī)院內(nèi)的病房、病人使用過的用具、布類的衛(wèi)生處理等。
一、物理消毒滅菌法
   物理消毒滅菌法是醫(yī)學(xué)實(shí)踐中常用的方法，通常包括熱力、紫外線、輻射、超聲波和濾過除菌等。
(一)熱力滅菌法
    熱滅菌法 利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的一切蛋白質(zhì)變性，酶活性消失，致使細(xì)胞死亡。通常有干熱、濕熱和間歇加熱滅菌等法。
   熱力能破壞微生物的蛋白質(zhì)和核酸，使蛋白質(zhì)變性凝固，核酸解鏈崩裂，從而導(dǎo)致其死亡。
   1.干熱滅菌法 直接利用火焰將微生物燒死（如燒接種環(huán)、載玻片和試管口等）。不能用火焰滅菌的物品則利用熱空氣滅菌,將物品放在烘箱中加熱到160～170℃,持續(xù)90分鐘，此法適用于玻璃、金屬和木質(zhì)的器皿。
   (1)焚燒與燒灼 焚燒僅用于廢棄的被病原微生物污染的物品、垃圾、人及動物尸體等。燒灼用于微生物實(shí)驗(yàn)室的接種環(huán)、金屬器械、試管口、瓶口等的滅菌。
   (2)干烤 使用干烤箱滅菌，一般需加熱至160℃～170℃經(jīng)2h，可達(dá)到滅菌的目的。適用于玻璃器皿、瓷器、金屬物品等的滅菌。
   2.濕熱消毒滅菌法
   濕熱滅菌 以沸水、蒸氣和蒸氣加壓滅菌。巴氏滅菌法就是濕熱滅菌，此法有兩種方式，①低溫長時(shí)間處理：在61.7～62.8℃下處理30分鐘；②高溫短時(shí)間處理：在71.6℃或略高溫度下處理15分鐘。在上述諸法中，以蒸氣加壓滅菌效果好，可用常壓蒸氣滅菌，也可在高壓蒸氣鍋中（一般使用1千克/厘米2）滅菌,其蒸氣溫度可達(dá)121℃,能將耐熱的芽孢在30分鐘內(nèi)全部殺死。但對某些易被高壓破壞的物質(zhì)，如某些糖或有機(jī)含氮化合物，宜在0.6千克/厘米2壓力下(110℃)滅菌15～30分鐘。
   (1)巴氏消毒法 法國學(xué)者巴斯德創(chuàng)用而得名。主要以較低溫度殺滅病原菌或特定微生物，而使物品中不耐熱成分不被破壞。此法有兩種：一種方法是加熱61.1℃～62.8℃、30min；另一種方法是加熱71.7℃、15～30s。現(xiàn)在人們多用后種方法對牛奶進(jìn)行消毒。
   (2)煮沸法 煮沸100℃、5～10min，可殺死細(xì)菌繁殖體。芽胞則需要煮沸1～2h。常用于注射器、食具與飲水的消毒。
   (3)流通蒸氣法 用阿諾(Arnold)蒸鍋或普通蒸籠，加熱100℃、15～30min，可殺滅細(xì)菌的繁殖體。若將消毒后的物品放入37℃孵箱培養(yǎng)，使芽胞發(fā)育成繁殖體，次日再蒸一次，如此連續(xù)三次以上，可達(dá)到滅菌效果，這種方法稱為間歇滅菌法。常用于不耐高溫的物品，如糖類、血清和雞蛋培養(yǎng)基等的滅菌。
   (4)高壓蒸氣滅菌法 是一種迅速而有效的滅菌方法。使用高壓蒸氣滅菌器，利用加熱產(chǎn)生蒸氣，隨著蒸氣壓力不斷增加，溫度隨之升高，通常壓力在103.4kPa(相當(dāng)舊制的15磅/吋 2 或1.05kg/cm 2 )時(shí)，器內(nèi)溫度可達(dá)121.3℃，維持15～30min，可殺滅包括芽胞在內(nèi)的所有微生物。此法常用于一般培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)器械及敷料等耐濕和耐高溫物品的滅菌。
(二)紫外線與電離輻射
   1.日光與紫外線 日光消毒是最簡單、經(jīng)濟(jì)的方法，將病人的被褥、衣服、書報(bào)等在日光下曝曬數(shù)小時(shí)，可殺死表面的大部分微生物。日光中殺菌的成份主要是紫外線。紫外線200～300nm時(shí)，具有殺菌作用，其中以265～266nm波長的紫外線殺菌力最強(qiáng)。紫外線的殺菌原理，主要是細(xì)菌DNA吸收紫外線后，一條鏈上相鄰的兩個(gè)嘧啶通過共價(jià)鍵結(jié)合形成二聚體，從而干擾了DNA的正常堿基配對，導(dǎo)致細(xì)菌死亡或變異。紫紅外線能透過石英，但不能穿過一般玻璃或薄紙，因此，紫外線只適用于物體表面及空氣的消毒。例如手術(shù)室、嬰兒室、傳染病房、無菌制劑室、微生物接種室的空氣消毒。
   2.電離輻射 X射線、γ射線和陰極射線等電離輻射，有較高的能量與穿透力，因而可產(chǎn)生較強(qiáng)的致死效應(yīng)。其機(jī)制在于產(chǎn)生游離基，破壞DNA。此法常用于大量一次性醫(yī)用塑料制品的消毒；亦可用于中藥成藥和食品的消毒，而不破壞其化學(xué)成分和營養(yǎng)成分。
(三)超聲波
   超聲波是不被人耳感受的高于 20千周/s的聲波。其殺菌機(jī)制主要是它通過水時(shí)發(fā)生空化作用，而破壞了細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)的膠體狀體，使其胞膜、胞質(zhì)分離，胞壁及胞膜破碎致細(xì)菌繁殖體死亡。此法主要用于粉碎細(xì)胞，以提取細(xì)胞組分或制備抗原等。
(四)微波
   是一種波長為 1mm到1m左右的電磁波，稱微波。它能穿透玻璃、塑料薄膜與陶瓷等物質(zhì)，但不能穿透金屬表面。目前用于消毒的微波有2,450MHz與915MHz兩種，常用于檢驗(yàn)室用品、非金屬器械、無菌病室的食品用具及其它用品的消毒。
(五)濾過除菌
   濾過除菌是用濾菌器阻留過濾液體和氣體的細(xì)菌，以達(dá)到無菌的目的。濾菌器含有微細(xì)小孔，只允許液體或氣體通過，而大于孔徑的細(xì)菌等顆粒不能通過。常用濾菌器有蔡氏濾器、玻璃濾器、薄膜濾器及高效顆粒空氣濾器四種。主要用于不耐熱的血清、抗毒素、生物藥品以及空氣等的除菌。
二、化學(xué)消毒法
   許多化學(xué)藥物都有抑制或殺滅微生物作用，按作用不同分為化學(xué)消毒劑和化學(xué)治療劑兩類，用于消毒、防腐和治療疾病。
(一)常用消毒劑的種類和應(yīng)用
   具有殺死微生物的化學(xué)藥物稱消毒劑。消毒劑對人體有毒性作用，只能外用，不能內(nèi)服。主要用于皮膚粘膜的傷口、器械、排泄物和周圍環(huán)境的消毒。消毒劑在低濃度時(shí)也可作防腐用，但防腐劑的關(guān)鍵是應(yīng)要對人體無毒性作用。消毒劑種類濃度與用途見表 13-1。
                       常用消毒劑的種類濃度與用途

1. 俞俊棠  生物工藝學(xué)--滅菌
2. 邱樹毅  生物工藝學(xué)  
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